آنالیز پاتوژن های کمپوست و گزارش نتایج

آنالیز پاتوژن های کمپوست و گزارش نتایج

فرمت: PDF   تعداد صفحات: 87

فهرست:

• مقدمه
• روش تعیین مجموع کلیفرم ها
• روش های آموزن کلیفرم های مدفوعی کمپوست
• روش تعیین اشریشیاکلی
• روش تعیین آنتروکوکسی ها
• روش های آزمون سالمونلا
• کرم های انگل دستگاه گوارش
• منابع

مقدمه

کمپوست محصول فرایندهای بیولوژیک است که در طی آن زباله هایی که منشاء آلی دارند در اثر فعالیت میکروارگانیسم های موجود در توده مواد آلی تجزیه می شوند و به حالت نسبتا پایدار در می آیند. در صورتی که فرایند آماده سازی و شرایط مناسب (رطوبت، اکسیژن و دما) به طور صحیح فراهم شود در اثر افزایش دمای حاصل از متابولیسم میکروبی تا ۵۵ درجه سانتیگراد و ثابت نگه داشتن دمای توده های کمپوست به مدت حداقل ۳ روز میکروارگانیسم های بیماری زا از بین می روند. اما از آنجایی که کمپوست عمدتا از بقایا و زائدات جامد شهری به دست می آید و همیشه امکان آلودگی و وجود عوامل بیماری زای مختلف در ماده اولیه کمپوست وجود دارد و از طرفی امکان وجود نقصی در فرایند تولید کمپوست و افزایش صحیح دما وجود دارد، اهمیت مساله از نظر بهداشت عمومی، کنترل و تضمین سلامت و ایمنی کمپوست حاصل امری ضروری است. عدم حضور پاتوژن ها در کمپوست تولید شده، نشانه بهداشتی و ایمنی بودن کمپوست جهت مصارف مختلف می باشد، لذا آنالیزهای مهمی همچون تعیین باکتری های کلیفرم، سالمونلا، آنتروکوکسی ها، کرم های انگلی، ویروس ها و… بر روی کمپوست باید انجام شود تا مطابق استانداردها باشد. از آنجائیکه براساس استاندارد ملی شماره ۱۳۳۲۱-۱ کلیفرم مدفوعی و سالمونلا به عنوان شاخص های مهم کود کمپوست درجه یک و دو، حدود استاندارد تعیین شده است (۱)، لذا در این فصل آزمون های ذیل تشریح خواهد شد.

1. روش های آزمون کلیفرم مدفوعی مطابق روش استاندارد ملی ۳-۱۳۳۲۱
2. روش های آزمون سالمونلا مطابق روش استاندارد ملی ۲-۱۳۳۲۱
3. تعیین تخم انگل (آسکاریس) به روش TMEEC

روش تعیین مجموع کلیفرم ها

روش بیشترین تعداد محتمل یا MPN دارای محدودیت های مختلفی از جمله نیاز به زمان، کار زیاد و تجهیزات زیاد برای جابجایی مقادیر زیاد مواد برای هر نمونه دارد. مطالعات نشان میدهد کشت گسترده و مستقیم در محیط های بسیار انتخابی و افتراقی (مثل مک کانگی آگار) برای ارگانیسم های آسیب دیده یا پایدار که قابلیت کشت ندارد، کارایی چندانی ندارد. لذا استراتژی های پیشنهادی استفاده توام از کشت های گسترده و MPN می باشد که بدین ترتیب از یک طرف نیاز به کاستن از طیف گسترده رقت های MPN سبب حذف حساسیت های پایین می شود و همچنین مشکلات کشت پذیری با روش های کشت گسترده نیز برطرف می گردد (۴).

تجهیزات مورد نیاز

تکنیک MPN

• لوله های کشت: لوله های در پیچ دار با اندازه ۱۵۰×۱۶ میلی متر
• لوله های رقیق سازی: لوله های در پیچ دار با اندازه ۱۶×۱۵۰ میلی متر که حاوی ۹ میلی لیتر بافر پپتون می باشند.
• انکوباتور: تنظیم شده در دمای ^oC 36±1
• لوله های دورهام: با اندازه ۶×۵۰ میلی متر
• کیف استوما کر (Stomacher) استریل

تکنیک کشت گسترده

• دستگاه کشت مارپیچ: جایگزین انتخابی برای روش معمول کشت گسترده
• پلیت های آگار: مک کانگی آگار
• میله های شیشه ای سرخم برای پخش کردن ارگانیسم ها در سطح پلیت آگار
• چراغ بونزن

مواد و معرف ها

• تکنیک MPN: برای تکنیک MPN به آب بافر پپتون محیط لوریل تریپتوز براث – LT نیاز است.
• کشت گسترده: برای کشت گسترده به اتانول ۷۰٪ برای استرلیزاسیون نیاز است.

روش آنالیز

تکنیک MPN

• تهیه مخلوط همگن با رقت ۱ به ۱۰:۲۰ گرم کمپوست را در یک کیف استوماکر استریل ریخته و با افزودن آب بافر پپتون وزن آن را به ۲۰۰ گرم برسانید. به این ترتیب رقت نمونه ۱ به ۱۰ خواهد شد.
• مخلوط به دست آمده را به مدت ۲ دقیقه با دور rpm ۲۶۰ همگن کنید. با استفاده از آب بافر پپتون سه رقت دیگر از این مجموعه رقت ها را تهیه کنید. برای این منظور یک میلی لیتر از رقت اولیه را برداشته و به ۹ میلی لیتر بافر پپتون اضافه کرده و به مدت ۵ الى ۱۰ ثانیه به صورت گردابی اختلاط دهید. این عمل را دو مرتبه دیگر تکرار کنید تا رقت های بعدی نیز به دست آید.
• تعداد ۹ لوله کشت در پیچ دار که هر کدام حاوی ۹ میلی لیتر محیط LT استریل و یک لوله دورهام است تهیه کنید.
• در محیط استریل ۱ میلی لیتر از نمونه همگن با رقت ۱ به ۱۰ را به ۳ لوله کشت در پیچ دار که هر کدام حاوی ۹ میلی لیتر LT استریل است اضافه کنید.
• در محیط استریل ۱ میلی لیتر از نمونه همگن با رقت ۱ به ۱۰۰ را به ۳ لوله کشت در پیچ دار که هر کدام حاوی ۹ میلی لیتر LT استریل است اضافه کنید.
• در محیط استریل ۱ میلی لیتر از نمونه همگن با رقت ۱ به ۱۰۰۰ را به ۳ لوله کشت در پیچ دار که هر کدام حاوی ۹ میلی لیتر LT استریل است اضافه کنید.
• لوله ها را به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت در دمای C° ۳۷۲ قرار دهید.
• وجود حباب های گاز در لوله دورهام را مورد بررسی قرار دهید. چنانچه در لوله دورهام گاز دیده شود نشان دهنده این است که لاکتوز تخمیر شده و نتیجه آزمایش مثبت است. تعداد لوله هایی را که در هر مجموعه از نظر تولید گاز مثبت هستند را ثبت کنید. با ضرب کردن نسبت جامدات در غلظت لوله، رقت ها را به وزن خشک تبدیل کنید. از این اعداد برای محاسبه MPN/g مجموع کلیفرم ها، استفاده خواهد شد.
• برای تبدیل MPN/g کل مواد جامد خشک فرض بر این است که:

(وزن مرطوب) MPN/g = (وزن مرطوب) MPN/mL

• بنابراین امکان محاسبه MPN/g کل مواد جامد بر اساس وزن خشک از طریق فرمول زیر فراهم می شود:

درصد کل مواد جامد / وزن مرطوب مرحله دو MPN/ml = (وزن خشک) MPN/g

 جهت توضیحات بیشتر به استاندارد شماره ۳-۱۳۳۲۱ موسسه استاندارد و تحقیقات صنعتی ایران (۱) مراجعه شود.

تکنیک کشت گسترده

اگر از دستگاه کشت خودکار مارپیچ استفاده می کنید، محیط کشت مک کانگی آکار تهیه کنید. اگر از روش استاندارد کشت گسترده استفاده می کنید محیط های کشت شش تایی تهیه کنید. سطح پلیت ها را با هوا خشک کنید. برای این کار پلیت ها را به مدت ۱ روز در دمای اتاق به صورت در بسته یا به مدت ۱۰ دقیقه زیر هود به صورت درب نیمه باز قرار دهید تا سطح آنها خشک شود.

ادامه مطلب را با دانلود فایل پیوستی مشاهده کنید.

حتما بخوانید:

⇐ اصول و روش های نمونه گیری پسماند

⇐ ارائه و تحلیل داده های مربوط به مدیریت پسماند

⇐ اجرای برنامه های مدیریت پسماند