آزمایشات میکروبیولوژی آب و فاضلاب

آزمایشات میکروبیولوژی آب و فاضلاب

فرمت: pdf  تعداد صفحات: 14

فهرست:

• استریلیزاسیون در آزمایشگاه
• آماده سازی و استریل کردن محیط های کشت میکروبی
• روش تخمیر چند لوله ای برای گروه کلیفرم (Multiple-tube Fermentation)
• تست احتمالی
• تست تاییدی
• تست تکمیلی
• رنگ آمیزی گرم (Gram Staining)
• رنگ آمیزی اسپور باکتری ها
• شمارش میکروارگانیسم های هتروتروف (HPC)
• روش کشت گسترده

استریلیزاسیون در آزمایشگاه

استریلیزاسیون به معنای از بین بردن تمامی اشکال زنده در یک محیط کشت یا ماده است. استریلیزاسیون به دو صورت خشک (فور) یا مرطوب (اتوکلاو) صورت می گیرد. استریلیزاسیون به دو روش فیزیکی و شیمیایی استفاده از مواد شیمیایی و گندزداها صورت می گیرد. روش های فیزیکی شامل سوزاندن، اتوکلاو کردن، استفاده از فور (آون)، فیلتراسیون و پرتو تابی است.

سوزاندن جهت استریل کردن لوپ سیمی یا آنس پس از انجام کشت میکروبی در آزمایشگاه استفاده می شود. دستگاه اتوکلاو با استفاده از فشار و دمای مناسب جهت استریل کردن مواد مقاوم به حرارت و محیط های کشت استفاده می شود. در اون از حرارت خشک برای استریل کردن ظروف شیشه ای، ظروف فلزی و موارد مشابه استفاده میشود. در این دستگاه از دما و زمان بیشتر برای استریل کردن استفاده می شود زیرا قدرت نفوذ حرارت خشک از حرارت مرطوب کمتر است. در آون معمولا از دمای ۱۷۰-۱۶۰ درجه سانتی گراد و زمان ۱/۵-۱ ساعت استفاده می شود. فیلتر کردن جهت استریل کردن هوا یا محلول ها با عبور دادن آنها از میان یک صافی ریز استفاده می شود. قطر منافذ فیلتر باید به اندازهای باشد که مانع عبور میکروارگانیسم شود. اما بعضی از انواع میکروارگانیسم ها مایکوپلاسما و ویروس ها به دلیل اندازه کوچکشان از فیلتر عبور خواهند کرد. بنابراین از فیلتراسیون می توان به عنوان روشی برای کاهش بار میکروبی هوا و محلول های حساس به حرارت نام برد. از پرتوهای گاما و فرابنفش نیز می توان به عنوان روش استریلیزاسیون نام برد. پرتو فرابنفش با اثر روی DNA و اختلال در آنها سبب جهش و مرگ سلولی می شود. از این روش برای استریل کردن هوای آزمایشگاه در هودهای آزمایشگاهی استفاده می شود. پرتو گاما برای استریل کردن سرنگ و ظروف آزمایشگاهی بسته بندی شده، در کارخانه های تولید ظروف آزمایشگاهی مورد استفاده قرار می گیرد.

آماده سازی و استریل کردن محیط های کشت میکروبی

از پودرهای مخصوص که صورت تجاری تهیه شده اند برای ساخت محیطهای کشت استفاده می شود. طرز ساخت این محیط های کشت بر روی ظروف آنها نوشته شده است. معمولا حجم ارلنی که در ساخت محیط کشت استفاده می شود، باید دو برابر حجم محلول باشد تا در اثر حرارت دادن یا جوشیدن سرریز نشود. حرارت دادن باید تا زمانی ادامه داده شود که محلول کاملا شفاف شود. پس از آن درب ارلن را با پنبه مسدود کرده و جهت استریل کردن، ارلن را در اتوکلاو (فشار ۱۵ پوند بر اینچ مربع و حرارت ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه قرار می دهیم. محیط کشت را بعد از استریل کردن تا ۴۰ درجه خنک کرده و در کنار شعله به پلیت های استریل انتقال دهید. به طوری که دو سوم حجم پلیت پر شود. پس از جامد شدن محیط کشت، درب پلیت ها را کامل بسته و تا زمان استفاده، به صورت وارونه در یخچال در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری کنید. لازم است بعضی از محیطهای کشت در لوله آزمایش استریل شوند.

روش تخمیر چند لوله ای برای گروه کلیفرم (Multipletube Fermentation)

گروه باکتری های کلیفرم تشکیل شده از تمام باکتری های هوازی، بی هوازی گرم منفی و غیراسپورزا، باکتری های میله ای هستند و باعث تخمیر لاکتوز و تشکیل گاز در دمای ۳۵°C و در زمان ۴۸ ساعت می شوند.

استاندارد این گروه را می توان به وسیله آزمایش تخمیر چند لوله ای انجام داد. این روش شامل آزمایش های زیر می باشد

۱) آزمایش احتمالی ۲) آزمایش تائیدی ۳) آزمایش تکمیلی ۴) آزمایش افتراقی

زمانیکه چندین لوله با غلظت های مختلف از نمونه، در آزمایش تخمیر استفاده می شود، نتایج به صورت محتمل ترین تعداد ممکن ارگانیسم (MPN) بیان می شود. این تخمین و محاسبه می تواند حجمی بیش از تعداد واقعی کلی فرم موجود بدهد. دقت هر تستی بستگی به تعداد لوله های تخمیر شده دارد. این روش به تشریح بهداشتی بودن آب بسیار کمک می کند. جدول MPN بر اساس فرضیه توزیع پواسون تهیه شده است.

ایمن بودن و سالم بودن آب معمولا با داشتن شرایط بهداشتی مهیا می شود و به واسطه تعدادی از نمونه های آب که نتایج مثبت یا منفی نشان داده اند، قضاوت می شود. اگر بیش از ۹۵ نتایج منفی باشد، بهداشتی بودن و سالم بودن آب تایید می شود. مراحل تست MPN به این صورت است.

تجهیزات و لوازم: لوله های تخمیر، پپتیدی دیش، اتوکلاو، انکوباتور، لوله آزمایش، پی پت استریل، آنس یا لوپ، یخچال، ظروف و سایر تجهیزات لازم

محلول ها: لاکتوز براث (محیط کشت لاکتوز)، محیط کشت لوريل تریپتوز براث، محیط کشت بریلیانت گرین لاکتوز براث (BGB)، محیط اندوآگار (Endo Agar)، محیط ائوزین متیل بلوآگار

ادامه مطلب را با دانلود فایل پیوستی مشاهده کنید.

حتما بخوانید:

⇐ آزمایشات فیزیکی و شیمیایی آب و فاضلاب

⇐ تحلیل، تفسیر و مدیریت نتایج آزمون های فیزیکو شیمیایی آب

⇐ آنالیز آب و فاضلاب